중합효소 연쇄 반응(PCR)의 가닥 혼성화

중합효소 연쇄 반응(PCR)의 가닥 혼성화

중합효소 연쇄 반응(PCR)은 시험관내 복제를 통해 농축액에서 DNA 부분의 다른 복제물을 얻는 것을 생각할 수 있습니다.
프레임워크 DNA는 RT-PCR에 의해 특사 RNA 제거(폴리-A RNA) 또는 미토콘드리아 DNA에서 얻은 상호 DNA와 마찬가지로 게놈 DNA가 될 수 있습니다.
DNA 검사에서 특정 DNA 그룹화를 많이 획득하는 절차입니다.
이 향상은 이중 버려진 DNA 형식의 복제에 따라 달라집니다.
그것은 변성 단계로 예비가 있는 하이브리드화 단계, 확장 단계의 세 단계로 구분됩니다.
모든 조합 단계의 결과는 수반되는 발전을 위한 형식으로 채워지며 이러한 방식으로 놀라운 향상이 이루어집니다.
중합 효소
연쇄 반응은 분리된 DNA(포맷 DNA), Taq 중합효소, 예비 및 완충 배열에서 과잉으로 4개의 데오 시 리보 뉴 클레오 사이드 삼인산 (dNTP)을 포함하는 반응 조합으로 완료됩니다.
혼합 반응을 포함하는 실린더 따뜻한 온난화 광장 지루 온도 사이클에 여러 차례 노출되어 클러에서 (신속하고 명백하게, A는 예를 들면 관이 저장 영역에 벽으로 하는 온도가 변경하는 장치 펠티에 충격으로 0~100°C) NS 기계적 조립은 용어의 프로그래밍과 온도 단계 패턴의 진행을 허용합니다.
각 주기는 많은 초의 세 번을 포함합니다.
중합효소 연쇄 반응(PCR) 과정은 다음과 같이 3단계로 나뉩니다.

1. 혼성화
후속 발전은 하이브리드 화입니다.
예비 하이브리드화는 온도라고 하는 40~70°C 범위 온도에서 대부분 수행됩니다.
온도를 낮추면 수소 결합이 변경되고 이어서 통합 가닥이 혼성화됩니다.
강화될 DNA의 측면에 있는 영역에 필수적인 짧은 단일 가닥 연속은 긴 가닥 네트워크 DNA보다 더 효과적으로 혼성화합니다.
혼성화 온도가 높을수록 혼성화가 더 구체적일수록 더 명시적입니다

2. 프라이머
중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 추출된 DNA에서 뉴클레오티드 배열의 특정 향상을 달성하려면 '올리고뉴클레오티드' 세트가 하나 이상 있어야 합니다.
복제를 위한 도입으로 채워질 '올리고뉴클레오티드'는 종합적으로 조정되며 향상하려는 수익 그룹의 두 가지 마무리와 가장 이상적인 상보성이어야 합니다.
기초 중 관심 있는 하나 가닥 DNA의 상류에서 발견되는 그룹화를 상호 인식하기 위한 것입니다.
다른 하나는 상보성에 의해 일관되게 유사한 부분 DNA의 상류 통합 가닥에서 발견되는 배열을 인식합니다.
예비 DNA는 관심 배열의 측면에 있는 그룹화에 대한 혼성화로 인해 복제가 매우 구체적으로 허용되는 단일 포기 DNA입니다.
예비의 크기는 그리드 DNA의 관심 그룹에 대해 적절하게 명시적인 혼성화를 보장하기 위해 일반적으로 10~30 개의 뉴클레오티드 범위입니다.

3. Taq 중합효소
DNA 중합효소는 복제를 허용하는데 대부분 우리는 DNA 중합 효소를 사용합니다.
지하 대수층에 서식하며 100°C 이상의 온도에 반대하는 극한 성 박테리아인 Thermus Aquaticus의 오염을 제거하거나 복제했습니다.
이 중합효소 (Taq 중합효소)는 일반적으로 대부분의 단백질을 변성하기에 적합한 약 100°C의 온도를 견딜 수 있는 놀라운 특징을 가지고 있습니다.
Thermus Aquaticus는 중합효소 작용에 이상적인 온도인 72°C에서 위안의 온도를 발견합니다.

4. 변성
온도를 높여서 두 가닥의 DNA가 분리되는 것입니다.
주 기간은 변성 온도라고 하는 94°C의 온도에서 완료됩니다.
이 온도에서 복제 시 네트워크로 채워지는 그리드 DNA가 변성됩니다.
80°C 이상의 온도에서는 수소 결합을 유지할 수 없으며 이중 버려진 DNA가 단일 가닥 DNA로 바뀌게 됩니다.

5. 연신율
해당 가닥의 융합으로써 72°C에서 Taq 중합효소는 준비된 단일 포기 DNA에 연결됩니다.
반응 혼합물에 존재하는 데오 시 리보 뉴 클레오 사이드 삼인산을 활용하여 복제를 촉매 합니다.
세 번째 기간은 연신 온도라고 하는 72°C의 온도에서 수행됩니다.
예비의 레이아웃 DNA 다운스트림 영역은 이러한 방식으로 구체적으로 혼합됩니다.
다음 주기에서 과거 주기에서 혼합된 조각은 따라서 격자 모양이 되며 몇 주기 후에 지배적인 종은 기초가 혼성화 되는 로케일 사이의 DNA 그룹화와 관련됩니다.
그것은(0.1 DNA의 분석 가능한 측정값을 통합 20-40 사이클이 소요 μg) 각 주기는 가상으로 과거 주기에 존재하는 DNA의 측정치를 복사합니다.
72°C에서 마지막 연장 패턴을 추가하도록 규정되어 있으며, 특히 프리미엄 배열이 막대한 경우(1 킬로 베이스보다 더 주목할만한) 각 킬로 베이스에 대해 2분의 속도로 중합효소 연쇄 반응(PCR) 크기가 6 킬로 베이스 미만인 배열을 강화하는 것을 생각할 수 있습니다.
중합효소 연쇄 반응(PCR) 반응은 매우 빠르며 몇 시간 동안 계속됩니다.(30주기의 PCR의 경우 2~3시간)